磁珠的參數(shù)和指標見Table 1,，產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：GSH磁珠參數(shù)和性能指標

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

注意：GSH磁珠，2-8℃ 保存,，不要冷凍,，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干。

2. 使用須知

l  本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

l  磁珠使用前要混合震蕩均勻

l  磁珠預(yù)處理要充分

l  孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結(jié)合效率

l  在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

l  禁止冷凍，離心磁珠,，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

l  建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

l  應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

l  用后及時再生,，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中，避免磁珠長菌

3. 應(yīng)用場景

適用于GST標簽融合蛋白的純化,，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本,。

4. 使用方法

實驗前準備

推薦緩沖液:

操作步驟

以大腸桿菌表達的GST標簽融合蛋白的純化為例

4.1樣品處理

1) 將收集到的菌體,，加入適量體積的Binding buffer,，加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為

1mM 的PMSF）,；加入溶菌酶，使終濃度為0.2-0.4mg/mL,。

2) 將菌體懸浮起來,，置于冰上進行超聲波破碎，如果破碎后的樣本過于粘稠,，可加入適

量核酸酶在冰上孵育30mins,，獲得的即為粗蛋白樣品。

4.2磁珠預(yù)處理

1) 磁珠的使用量可根據(jù)目標蛋白產(chǎn)量來計算,，磁珠使用量可稍過量,，如目標蛋白預(yù)估產(chǎn)

量為5mg，則加入5-10mL（20%,，v/v）磁珠,。

2) 磁珠平衡：將磁珠充分渦旋混勻，然后立即取出所需磁珠加入到離心管中,，置于磁力

架上磁吸,，吸棄上清液；加入與懸浮磁珠等體積的Binding buffer,，渦旋15s,，然后置于磁

力架上磁吸，澄清后,，可翻轉(zhuǎn)離心管（保持離心管在磁力架上）,，使離心管蓋上殘留的磁

珠潤洗下來，待上清澄清后去掉上清液,，重復(fù)洗滌2 次,。

4.3結(jié)合

將粗蛋白樣品加入到上述平衡后的磁珠管中，蓋上管蓋,，將磁珠置于旋轉(zhuǎn)混勻儀上室

溫混合20-30mins（如有需要,，也可于2-8℃下旋轉(zhuǎn)混合1h）。

4.4漂洗

1) 將上述離心管置于磁力架上,，待上清澄清后,，吸取上清液至新的離心管中以備檢測。

2) 加入等體積的Wash buffer 重懸磁珠,，吹打5-10 次或旋轉(zhuǎn)2mins,，然后將離心管置于

磁力架上，上清澄清后,，吸取上清液到新的離心管中以備檢測,，重復(fù)該洗滌步驟至少2 次。

4.5洗脫

1) 根據(jù)需要，加入適量的Elution Buffer 于磁珠管中,，吹打混勻后,，將離心管置于旋轉(zhuǎn)

儀上混合5-10mins；

2) 將離心管置于磁力架上,，待上清澄清,，吸取上清液保存?zhèn)溆茫蝗缬行枰?，可重?fù)該步

驟一次,，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否完全洗脫,。

4.6磁珠保存

1) 向磁珠中加入Elution Buffer,，渦旋震蕩30s，然后磁吸去上清,，共洗滌3 次,；

2) 向磁珠中加入4 倍磁珠體積的20%乙醇，置于2-8℃保存,。

4.7流程優(yōu)化

上述流程為推薦流程,，根據(jù)目標蛋白的不同，可從以下幾個方面進行流程上的優(yōu)化,，

以獲得更高的回收率和純度。

1) 調(diào)整粗蛋白濃度,，如蛋白濃度過低,，則不利于蛋白的回收；

2) 調(diào)整磁珠用量,、孵育時間,、洗脫時間、洗脫次數(shù)等,；

3) 緩沖液中加入1~10mM 的DTT,，有利于部分GST 標簽蛋白與磁珠的結(jié)合；

4) 緩沖液中加入0.05%的Tween-20 可降低磁珠和離心管對非特異蛋白的吸附,。