肝素磁珠(Heparin Magnetic Beads),,表面偶聯(lián)的肝素帶有負(fù)電性硫酸根離子基團(tuán),,可以與帶正電的蛋白結(jié)合,也可與生長(zhǎng)因子及抗凝血酶AT Ⅲ結(jié)合,,可以快速高效地從血漿中一步捕獲到目的蛋白,,然后通過(guò)磁性分離實(shí)現(xiàn)純化目標(biāo)蛋白的目的。樣本和磁珠的體積范圍也可靈活的調(diào)整,,純化的過(guò)程能夠簡(jiǎn)便的放大,。配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動(dòng)化蛋白純化工作站可同時(shí)處理1-96 個(gè)樣本。
磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1,,產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。
Table 1:肝素磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)
基質(zhì) | 瓊脂糖 |
粒徑 | 10-37μm |
載量 | ≥2mg/mL(磁珠純體積) |
磁珠濃度 | 20%(v/v) |
儲(chǔ)存溫度 | 2-8℃ |
保存液 | 20% (v/v) 乙醇 |
保質(zhì)期 | 2年 |
Table 2:產(chǎn)品規(guī)格
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 磁珠濃度 | 規(guī)格 |
肝素磁珠 | MG901 | 20% v/v磁珠 | 5ml |
MG902 | 20% v/v磁珠 | 50ml |
注意:肝素磁珠,2-8℃ 保存,,不要冷凍,,禁止磁珠在儲(chǔ)存和使用過(guò)程中變干。
l 本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用
l 磁珠使用前要混合震蕩均勻
l 磁珠預(yù)處理要充分
l 孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),,以保持最大結(jié)合效率
l 在使用及保存磁珠過(guò)程中,,禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥
l 禁止冷凍,離心磁珠,,防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷
l 建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白
l 應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗
l 用后及時(shí)再生,,避免將磁珠長(zhǎng)時(shí)間置于低pH的緩沖液中,避免磁珠長(zhǎng)菌
適用于從血漿中一步捕獲到目的蛋白,,配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動(dòng)化蛋白純化工作站可同時(shí)處理1-96 個(gè)樣本,。
推薦緩沖液:
Binding/ Wash Buffer | 50 mM Tris-HCl, pH 8.0 |
Elution Buffer | 50 mM Tris-HCl, 1M NaCl, pH 8.0 |
(以人血漿中抗凝血酶Ⅲ的純化為例)
取人血漿1mL 加入至1.5mL EP 管中,,接著加入500μL Binding Buffer,充分混勻
充分混勻磁珠,,取1mL 磁珠懸液置于1.5mL EP 管中,,磁吸去上清;
用1mL 結(jié)合/清洗液清洗2-3 次即可用于后續(xù)蛋白純化,。
在步驟4.2 預(yù)處理的磁珠管中加入處理的樣品溶液,在室溫下震蕩混勻15-30mins,,使樣
品和磁珠充分接觸并吸附,,然后進(jìn)行磁性分離,移棄上清液
在上述分離得到的磁珠中加入1mL 結(jié)合/清洗液,,充分混勻磁珠,,磁性分離棄上清。重復(fù)
該操作3 次,。
在上述完成磁珠洗滌的EP 管中加入200μL 洗脫液,,移液器吹打或者渦旋振蕩混勻,然后在
室溫下將EP 管置于混合儀混勻10-15mins 后進(jìn)行磁性分離,,收集上清液至新的EP 管,。
向EP 管中加入1mL 純化水,漩渦振蕩重懸后進(jìn)行磁性分離,,移棄上清,, 重復(fù)操作3 次;接著改用結(jié)合/清洗液洗滌磁珠3 次,;最后加入1mL 儲(chǔ)存液重懸磁珠,,置于2~8℃保存。
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