磁珠的參數(shù)和指標見Table 1,，產品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：重組蛋白 L磁珠參數(shù)和性能指標

Table 2：產品規(guī)格

注意：重組蛋白 L磁珠，2-8℃ 保存,，不要冷凍,，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干。

2. 使用須知

l  本產品須與磁性分離器配套使用

l  磁珠使用前要混合震蕩均勻

l  磁珠預處理要充分

l  孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結合效率

l  在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

l  禁止冷凍，離心磁珠,，防止對磁珠產生不可逆的損傷

l  建議磁珠僅重復純化同種蛋白

l  應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗

l  用后及時再生,，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中，避免磁珠長菌

3. 應用場景

知禾泰克重組蛋白 L磁珠專為高通量抗體純化開發(fā),，應用場景包括重組抗體培養(yǎng)基條件優(yōu)化篩選,，重組抗體表達條件的優(yōu)化篩選，雜交瘤抗體篩選,，腹水抗體純化,，重組抗體活性評價和穩(wěn)定細胞株篩選等。

4. 使用方法

實驗前準備

推薦緩沖液:

操作步驟

以純化人血清為例，具體操作如下：

4.1 樣品處理

取人血清100μL (一般血清樣品中抗體含量約2-8mg/mL)至1.5mL 離心管中,，加入

900μL Binding/Washing buffer,，充分混勻。

4.2 磁珠預處理

1）充分混勻磁珠后,，取200μL 磁珠懸液到2mL 離心管中,，磁性分離，棄上清,；

2）加入1mL Binding/Washing Buffer 于離心管中,，反復顛倒3-5 次使磁珠充分重懸，磁

性分離,，棄上清,；該步驟重復一次。

注：磁珠的用量可根據(jù)磁珠對目標抗體的最大結合量進行調節(jié),，可根據(jù)磁珠的抗體結合

能力計算磁珠的大概用量,，建議磁珠用量應為目標抗體含量的1.2-1.5 倍。

4.3 結合

在處理好的磁珠管中加入步驟4.1 處理的樣品溶液,，振蕩均勻,，在室溫下置于翻轉混合

儀或者手動輕輕翻轉，使樣品和磁珠充分接觸混合結合15mins,，進行磁性分離,，棄上清。

4.4 漂洗

加入1mL 的Binding/Washing Buffer 于離心管中,，反復顛倒3-5 次使磁珠充分重懸,，

磁性分離，棄上清,；再重復該步驟2 次,。

4.5 洗脫

1) 加入0.5-1mL Elution Buffer，室溫下置于翻轉混合儀或者手動輕輕翻轉10mins,，置于

磁力架上進行磁性分離,，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標抗體,；

2) 若需要,，可重復上述步驟，收集洗脫液至新離心管中,，以檢測目標抗體是否完全洗脫

（Elution Buffer 用量建議最終洗脫抗體濃度在0.5-1.2mg/mL,，以確保一次洗脫可將95%

以上的目標抗體被洗脫下來，用量過少會導致洗脫后仍有部分抗體殘留于磁珠上）,。

4.6 中和

在以上含抗體的洗脫液中加入1/10 抗體洗脫體積的Neutrilization buffer,，混勻使其pH

值保持在中性環(huán)境下，以維持抗體的生物活性,，避免失活,。

4.7 磁珠后處理

1) 向裝有磁珠的離心管中加入1mL Elution Buffer，渦旋震蕩5s,，磁性分離棄上清,。重

復操作2 次；

2) 加入1mL Binding/Washing buffer,，渦旋5s,，磁性分離棄上清；重復操作2 次,；

3) 加入Storage buffer 重懸磁珠,，置于2-8℃保存。

4.8 磁珠再生

磁珠多次使用后會有沉淀蛋白,、強疏水性蛋白,、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上，

為了保證磁珠的使用效率,，建議持續(xù)使用5 次后進行磁珠再生處理,。

1) 約每1 mL（10mg/mL）磁珠加入1 mL（1%,，v/v）Triron X-100 磁珠再生緩沖液，振

蕩均勻,，在室溫下置于翻轉混合儀或者手動翻轉混合10 mins 后進行磁性分離,，棄上清；

2) 加入1 mL Binding/Washing buffer 進行重懸,，磁性分離,，棄上清，重復該操作3 次,；

3) 加入1 mL Storage buffer 重懸磁珠,，置于2-8℃保存。

4.9 流程優(yōu)化

磁珠與抗體的的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關,，請確認抗體的類型與

Protein L 配基的親和效率（附表）：

1．抗體所屬亞型與Protein L 的親和度較低：a. 增加抗體與磁珠的孵育時間（30-120

mins）,；b. 提高結合緩沖液的pH 值（8-9）；c. 降低離子強度（25-100 mM NaCl）等方

法提高親和效率,；d. 選擇與目標抗體具有更高親和度的配基（如Protein G 或Protein A）,。

2．抗體與Protein L 配基親和度太高導致抗體洗脫效率低：a．降低洗脫緩沖液的pH 值

1.9-2.5；b．增大洗脫緩沖液的離子強度（可選用2-3 M MgCl2）,；c．延長洗脫時間,，提

高洗脫效率。

附表