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名稱描述內(nèi)容

MG801 MG802 Strep Tactin磁珠(Strep Tactin Magnetic Beads)

    發(fā)布時(shí)間: 2025-01-21 10:41    

Strep Tactin磁珠(Strep Tactin Magnetic Beads),是由NHS 活化的瓊脂糖磁珠偶聯(lián)Strep-Tactin 制備形成的復(fù)合微粒,,該產(chǎn)品能夠快速分離純化Strep-tag II 標(biāo)簽蛋白,,Strep-Tactin 與鏈霉親和素相比,對(duì)Strep-Tag II 的親和能力更強(qiáng)大,,且分離純化條件溫和,,在生理?xiàng)l件下即可洗脫。Strep-Tag II 與其它標(biāo)簽相比,,分子量更小,,僅為1kDa 左右,對(duì)融合后的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能影響更小,,能夠有效保留蛋白質(zhì)的活性,,一步提取即可獲得純度更高的蛋白。配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動(dòng)化蛋白純化工作站可同時(shí)處理1-96 個(gè)樣本,。

磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1,,產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2。

 

Table 1:Strep Tactin磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)


基質(zhì)

瓊脂糖

粒徑

10-37μm

載量

≥7mg/mL(磁珠純體積)

磁珠濃度

20%(v/v)

儲(chǔ)存溫度

2-8℃

保存液

1×PBS,,含0. 02%Tween-20,,0.05%Proclin300

保質(zhì)期

2年

 

Table 2:產(chǎn)品規(guī)格


產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

磁珠濃度

規(guī)格

Strep Tactin磁珠

MG801

20% v/v磁珠

5ml

MG802

20% v/v磁珠

50ml

 

注意:Strep Tactin磁珠,2-8℃ 保存,,不要冷凍,,禁止磁珠在儲(chǔ)存和使用過程中變干,。

 

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中,,禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥

禁止冷凍,,離心磁珠,防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

用后及時(shí)再生,,避免將磁珠長(zhǎng)時(shí)間置于低pH的緩沖液中,,避免磁珠長(zhǎng)菌


應(yīng)用場(chǎng)景

適用于Strep-Tag融合蛋白的純化,配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動(dòng)化蛋白純化工作站可同時(shí)處理1-96 個(gè)樣本,。

使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

推薦緩沖液:

Binding/ Wash Buffer

10mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH   8.0

Elution Buffer

50mM d-Biotin in Binding Buffer

Regeneration Buffer

0.5M NaOH or 1mM HABA in Binding Buffer


操作步驟

樣品處理

本操作說明書提供以下常見樣品處理方法:

1) 菌體內(nèi)表達(dá)蛋白:菌體用適量的Binding Buffer 稀釋,,如實(shí)驗(yàn)需要,可加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1mM PMSF),,重懸菌體,,冰浴超聲裂解菌體,即為粗蛋白樣品,。

2) 胞外表達(dá)蛋白:離心取上清液加入等量Binding Buffer 稀釋,,即為粗蛋白樣品。

3) 動(dòng)物細(xì)胞胞內(nèi)表達(dá)蛋白:收集細(xì)胞PBS 洗滌1 次后棄上清,;接著用適量含1%(v/v)Triton X-100 或1% (v/v) NP-40 的Binding Buffer 重懸,,加入蛋白酶抑制劑(如1mM 的PMSF),冰浴10mins,,即為粗蛋白樣品,。

磁珠預(yù)處理

一般情況下,磁珠的使用量是由使用者根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計(jì)算獲得,。

1) 充分渦旋混勻后,立即取適量磁珠懸液于離心管中,,然后將離心管置于磁分離器上,,澄清后吸棄上清液。

2) 加入等體積的Binding Buffer,,取下離心管后渦旋混勻10s,,后置于磁分離器上,澄清后吸棄上清液,,重復(fù)此操作1 次,。

結(jié)合

1) 將5-10mL 粗蛋白樣品轉(zhuǎn)移到裝有已預(yù)處理磁珠的離心管中,蓋緊離心管蓋,;

2) 將離心管渦旋震蕩15s 后將其置于旋轉(zhuǎn)混合儀上,,旋轉(zhuǎn)混合30mins 或2-8℃混合1h;

3) 混合結(jié)束后,,將其置于磁力架上,,顛倒混合數(shù)次,,潤(rùn)洗管壁和管蓋上的磁珠,上清澄清后移去上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測(cè),。

漂洗

向上述磁珠中加入5~10 mL Washing Buffer,,漩渦混合2mins,磁性分離,,移出清洗液到新的離心管中,,以備取樣檢測(cè);重復(fù)操作該步驟,。

洗脫

向磁珠管中加入2~5 mL Elution Buffer(用戶可根據(jù)目標(biāo)蛋白濃度需求改變洗脫體積)于離心管中,,蓋緊離心管蓋,然后將離心管置于垂直混合儀上,,室溫垂直混合洗脫10mins,;磁性分離,收集洗脫液到新的離心管中,,即為純化的目標(biāo)蛋白樣品,;

注:若需要可重復(fù)上述步驟1 次,收集樣品到新離心管以檢測(cè)蛋白是否洗脫完全,。

磁珠保存和再生

NaOH 再生:洗脫后的磁珠按照以下順序進(jìn)行洗滌,,5~10mL 純化水洗滌3 次、5~10mL 0.5M NaOH 洗滌3 次,、純水洗滌至中性,,加入10mL 保存液,置于2~8℃保存,。

HABA 再生:用脫硫生物素洗脫目標(biāo)蛋白的磁珠還可以用HABA 緩沖液再生,,加入5~10mL 1mM HABA 洗滌磁珠5 次,接著用Binding Buffer 洗滌磁珠至磁珠本身顏色,,每

次洗滌5mins,,最后加入10mL 保存液,將磁珠放置2~8°C 保存,。

流程優(yōu)化

以上操作流程適用于大部分Strep-Tag II 標(biāo)簽蛋白的純化,, 根據(jù)目標(biāo)蛋白與Strep-Tactin 蛋白純化磁珠的結(jié)合性能不同,用戶可以從以下幾個(gè)方面對(duì)純化流程進(jìn)行優(yōu)化,,

以提高目標(biāo)蛋白的回收率和純度,。

1)提高目標(biāo)蛋白回收率的參考方法:a.延長(zhǎng)蛋白溶液與磁珠孵育的時(shí)間;b.添加合適的蛋白酶抑制劑,,防止目標(biāo)蛋白降解,;c.增加磁珠用量;d.延長(zhǎng)洗脫目標(biāo)蛋白的時(shí)間或

增加洗脫次數(shù),。

2)提高目標(biāo)蛋白純度的參考方法:a.在純化過程中添加合適的蛋白酶抑制劑,,防止目標(biāo)蛋白降解,;b.延長(zhǎng)洗滌的時(shí)間,增加洗滌次數(shù),。


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