在抗體藥物開發(fā)、分子酶開發(fā)、免疫診斷、檢測(cè)試劑開發(fā)及科學(xué)研究等領(lǐng)域,上游篩選得到大量候選克隆,需要進(jìn)行初步評(píng)測(cè),前提是對(duì)大量原始樣本進(jìn)行高通量微量制備。比如抗體藥物開發(fā)過(guò)程中,通過(guò)抗體庫(kù)或者雜交瘤等篩選方法初篩得到成百上千個(gè)陽(yáng)性候選克隆,需要高通量純化、濃縮,得到純度和濃度適用于活性評(píng)測(cè)的樣品。目前,常用的蛋白純化方法是柱層析法,該方法在實(shí)現(xiàn)高通量和自動(dòng)化方面有局限性,成百上千候選克隆的柱層析純化需要消耗大量人力和時(shí)間,所以迫于時(shí)間和成本壓力,研發(fā)過(guò)程中通常會(huì)放棄大部分初篩陽(yáng)性候選克隆,只挑選少量克隆進(jìn)行表達(dá)純化和評(píng)測(cè),導(dǎo)致丟失 “優(yōu)秀克隆”。
純化案例
案例1:自動(dòng)純化293細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)培養(yǎng)上清(人IgG)(PP24+蛋白A磁珠)
純化結(jié)果:
SDS-PAGE變性電泳圖:
案例2:自動(dòng)純化小鼠腹水(小鼠IgG)(PP32+蛋白A磁珠)
純化結(jié)果:
SDS-PAGE變性電泳圖:
案例3:自動(dòng)純化原核表達(dá)上清(His-tag Protein)(PP96+Ni磁珠)
純化結(jié)果:
SDS-PAGE變性電泳圖: