Table 1：rProtein G Magnetic Beads 參數(shù)和性能指標(biāo)

Table 2：試劑和規(guī)格

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離設(shè)備配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài)，以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍,，離心磁珠，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

用后及時再生,，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,，避免磁珠長菌

使用方法

?  樣品預(yù)處理（以純化1ml小鼠腹水為例，目標(biāo)抗體約1-2mg）

用Wash Buffer將小鼠腹水稀釋3-5倍,。（雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清可使用Wash Buffer調(diào)節(jié)pH至7.0-8.0,。）

?  磁珠預(yù)處理

顛倒混勻磁珠，吸取2mL 10%（v/v）磁珠于準(zhǔn)備好的5ml EP管內(nèi),，

放置在磁力架上,，靜置1min，吸棄上清,；

加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer 2ml（這里的等體積是指磁珠加保存液的總體積）,，取下EP管，顛倒混勻1min,；

放置在磁力架上,，靜置1min，吸棄上清；

重復(fù)1次,。

?  結(jié)合

將1ml小鼠腹水（pH7.0-8.0）用Wash Buffer稀釋3倍至4ml,，加入至裝有磁珠的EP管中，顛倒混勻,，室溫緩慢旋轉(zhuǎn)孵育1h（具體時間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整）,。

?  洗滌

將裝有磁珠跟樣本的EP管放置在磁力架上，靜置1min,，吸棄上清,，加入與磁珠等體積的Wash Buffer（2ml），顛倒混勻1min,，靜置在磁力架1min,，吸棄上清；

重復(fù)5次,。

?  洗脫

加入3-5倍磁珠體積（2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul）的Elution Buffer（600ul）,，室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫10min；

靜置在磁力架上,，吸走上清,，得到洗脫1；

再加入3-5倍磁珠體積（2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul）的Elution Buffer（600ul）,，室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫10min,；

靜置在磁力架上，吸走上清,，得到洗脫2,；

向洗脫的上清中加入1/10 Elution Buffer體積的Neutralization Buffer（60ul）。

分別測洗脫1和洗脫2的濃度,，根據(jù)需要的抗體濃度決定是否混合,。

?  磁珠再生（以再生2ml 10%v/v磁珠為例）

（1）將磁珠置于磁力架上,，吸棄上清,，向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Elution Buffer（2ml），室溫緩慢旋轉(zhuǎn)5min,，靜置在磁力架上,，吸棄上清；

（2）向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer（2ml）,，再加入1%（v/v）TritionX-100,，室溫緩慢旋轉(zhuǎn)10min，靜置在磁力架上,，吸棄上清,；

（3）向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer（2ml），室溫緩慢旋轉(zhuǎn)2min，靜置在磁力架上,，吸棄上清,，重復(fù)一次；

（4）向EP管內(nèi)加入1.8ml 20%乙醇,，使磁珠的濃度保持在10% (v/v) ,，4℃保存。

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