重組蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本產(chǎn)品將重組Protein G高密度氨基偶聯(lián)到磁性瓊脂糖微球表面,,具有高載量,,高特異性,高回收率和低非特異吸附的特性,??山Y(jié)合293/CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清、雜交瘤細(xì)胞上清,、小鼠腹水和血清等樣本中的IgG或帶有FC標(biāo)簽的重組蛋白,。重組Protein G只保留了C1,C2和C3三個(gè)抗體特異結(jié)合的結(jié)構(gòu)域,,降低了非特異性吸附,,因此通過(guò)一步結(jié)合和洗脫即可得到純度大于90%的目的蛋白。Protein G可用于純化不能與Protein A很好結(jié)合的哺乳動(dòng)物IgG,。相對(duì)于Protein A,,Protein G對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG有著更高的親和力,尤其是對(duì)于人 IgG3,,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a,。
Protein A和Protein G與不同來(lái)源及亞類的免疫球蛋白結(jié)合能力不一樣,,具體可根據(jù)目標(biāo)抗體的種屬來(lái)源及亞型選擇磁珠的類別。
磁珠密度 | 0.95-1.05 g/mL純磁珠 |
磁珠濃度 | 380-580個(gè)/mg純磁珠 |
磁響應(yīng)速度 | ≤ 45 s |
粒徑 | 20-80um |
偶聯(lián)方式 | 氨基偶聯(lián) |
載量 | hIgG≥50 mg/ml(100%磁珠) |
保存緩沖液 | 20%乙醇 |
保存溫度 | 2-8℃ |
產(chǎn)品名稱 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存條件 |
rProtein G Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
本產(chǎn)品須與磁性分離設(shè)備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預(yù)處理要充分
孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),,以保持最大結(jié)合效率
在使用及保存磁珠過(guò)程中,禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥
禁止冷凍,,離心磁珠,,防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白
應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗
用后及時(shí)再生,避免將磁珠長(zhǎng)時(shí)間置于低pH的緩沖液中,,避免磁珠長(zhǎng)菌
(以純化1ml小鼠腹水為例,,目標(biāo)抗體約1-2mg)
用Wash Buffer將小鼠腹水稀釋3-5倍。(雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清可使用Wash Buffer調(diào)節(jié)pH至7.0-8.0,。)
顛倒混勻磁珠,,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于準(zhǔn)備好的5ml EP管內(nèi),
放置在磁力架上,,靜置1min,,吸棄上清;
加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer 2ml(這里的等體積是指磁珠加保存液的總體積),,取下EP管,,顛倒混勻1min;
放置在磁力架上,,靜置1min,,吸棄上清;
重復(fù)1次,。
將1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀釋3倍至4ml,,加入至裝有磁珠的EP管中,顛倒混勻,,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)孵育1h(具體時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整),。
將裝有磁珠跟樣本的EP管放置在磁力架上,靜置1min,,吸棄上清,,加入與磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),顛倒混勻1min,,靜置在磁力架1min,,吸棄上清;
重復(fù)5次,。
加入3-5倍磁珠體積(2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul)的Elution Buffer(600ul),,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫10min;
靜置在磁力架上,,吸走上清,,得到洗脫1,;
再加入3-5倍磁珠體積(2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul)的Elution Buffer(600ul),室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫10min,;
靜置在磁力架上,,吸走上清,得到洗脫2,;
向洗脫的上清中加入1/10 Elution Buffer體積的Neutralization Buffer(60ul),。
分別測(cè)洗脫1和洗脫2的濃度,根據(jù)需要的抗體濃度決定是否混合,。
(以再生2ml 10%v/v磁珠為例)
(1)將磁珠置于磁力架上,,吸棄上清,向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Elution Buffer(2ml),,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)5min,,靜置在磁力架上,吸棄上清,;
(2)向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),,再加入1%(v/v)TritionX-100,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)10min,,靜置在磁力架上,,吸棄上清;
(3)向EP管內(nèi)加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)2min,,靜置在磁力架上,吸棄上清,,重復(fù)一次,;
(4)向EP管內(nèi)加入1.8ml 20%乙醇,使磁珠的濃度保持在10% (v/v) ,,4℃保存,。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |
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