耐堿蛋白A磁珠(ATPA Magnetic Beads) 本產品將重組耐堿蛋白A (Recombinant Alkali-Tolerant Protein A)高密度環(huán)氧基偶聯(lián)到磁性瓊脂糖微球表面,具有高載量,高特異性,高回收率,低非特異吸附和強耐堿性的特性。可結合293/CHO細胞培養(yǎng)上清、雜交瘤細胞上清、小鼠腹水和血清等樣本中的IgG或帶有FC標簽的重組蛋白。重組ATPA只保留了Protein A中抗體特異結合的部分結構域,與Protein A相比,對樣品的純化效果幾乎不變,但對堿的耐受性大大提升,在重復使用時,極大地降低了樣品交叉污染的風險。
磁珠的參數和指標見Table 1,產品規(guī)格見 Table 2,溶液配方見Table 3。
磁珠密度 | 0.95-1.05 g/mL純磁珠 |
磁珠濃度 | 380-580個/mg純磁珠 |
磁響應速度 | ≤ 45 s |
粒徑 | 20-80um |
ATPA偶聯(lián)方式 | 環(huán)氧基偶聯(lián) |
載量 | hIgG≥40 mg/ml(100%磁珠) |
保存緩沖液 | 20%乙醇 |
保存溫度 | 2-8℃ |
產品名稱 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 數量 | 保存條件 |
ATPA Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
本產品須與磁性分離設備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預處理要充分
孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),以保持最大結合效率
在使用及保存磁珠過程中,禁止磁珠長時間干燥
禁止冷凍,離心磁珠,防止對磁珠產生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復純化同種蛋白
應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗
用后及時再生,避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,避免磁珠長菌
(以純化1ml小鼠腹水為例)
用Wash Buffer將小鼠腹水稀釋3-5倍。(細胞培養(yǎng)上清可使用Wash Buffer調節(jié)pH至7.0-8.0。)
顛倒混勻磁珠,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于準備好的5ml EP管內,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液;
加入1.8ml的Wash Buffer,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,重復2次;
如有控內毒的需要,請做下面兩個步驟:
加入1.8 ml 0.1M NaOH(Cleaning Buffer)孵育 15 分鐘。然后使用磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,重復此步驟1次。
加入1.8ml的Wash Buffer,顛倒混勻1min,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,重復2次。
將1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀釋3倍至4ml,加入至裝有磁珠的EP管中,顛倒混勻,室溫緩慢旋轉孵育1h(具體時間可根據結合效果調整)。
將裝有磁珠跟樣本的EP管放置在磁力架上,靜置1min,吸棄上清,加入1.8ml Wash Buffer,顛倒混勻1min,靜置在磁力架1min,吸棄上清;
重復5次。
加入3-5倍磁珠體積的Elution Buffer(600ul),室溫緩慢旋轉洗脫5min;
靜置在磁力架上,吸走上清,得到洗脫1;
再加入3-5倍磁珠體積的Elution Buffer(600ul),室溫緩慢旋轉洗脫5min;
靜置在磁力架上,吸走上清,得到洗脫2;
向洗脫的上清中加入1/10 Elution Buffer體積的Neutralization Buffer(60ul)。
分別測洗脫1和洗脫2的濃度,根據需要的抗體濃度決定是否混合。
(以再生2ml 10%v/v磁珠為例)
(1)將磁珠置于磁力架上,吸棄上清,向EP管內加入與1.8ml Elution Buffer,室溫緩慢旋轉5min,靜置在磁力架上,吸棄上清;
(2)向EP管內加入與1.8ml的Cleaning Buffer,室溫緩慢旋轉15min,靜置在磁力架上,吸棄上清,重復此步驟1次;
(3)向EP管內加入與1.8ml的Wash Buffer,室溫緩慢旋轉2min,靜置在磁力架上,吸棄上清,重復一次;
(4)向EP管內加入1.8ml 20%乙醇,使磁珠的濃度保持在10% (v/v) ,4℃保存。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |
ATPA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG501 |
ATPA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG502 |
重組蛋白和細胞因子 | 抗體 | 蛋白純化設備&磁珠 | 無血清細胞凍存液 | 感受態(tài)細胞 | 確定 |