磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見(jiàn)Table 1，產(chǎn)品規(guī)格見(jiàn) Table 2,。

Table 1：抗HA磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

 注意：抗HA磁珠，2-8℃ 保存,，不要冷凍,，禁止磁珠在儲(chǔ)存和使用過(guò)程中變干。

2. 使用須知

l  本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

l  磁珠使用前要混合震蕩均勻

l  磁珠預(yù)處理要充分

l  孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結(jié)合效率

l  在使用及保存磁珠過(guò)程中,，禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥

l  禁止冷凍，離心磁珠,，防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

l  建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

l  應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

l  使用本產(chǎn)品進(jìn)行IP 實(shí)驗(yàn)前,，需先確認(rèn)樣品中HA 融合蛋白的表達(dá)情況

l  在進(jìn)行細(xì)胞或菌體裂解時(shí)不要使用含DTT的裂解液，防止造成磁珠上Anti-HA 抗體脫落

3. 應(yīng)用場(chǎng)景

適用于HA-tag融合蛋白的純化,，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動(dòng)化蛋白純化工作站可同時(shí)處理1-96 個(gè)樣本,。

4. 使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

推薦緩沖液:

操作步驟

4.1樣品處理

樣品可以是細(xì)菌發(fā)酵液或者細(xì)胞裂解液，裂解完成后樣品溶液中不能含有顆粒不溶物,，可以

用0.22μm 濾膜過(guò)濾或10,000×g 離心15mins,。

4.2磁珠預(yù)處理

充分混勻Anti-HA 磁珠，取10-25μL 磁珠懸液,，置于1.5mL EP 管中,，加入500μL

結(jié)合/清洗緩沖液，充分混懸后置磁力架上磁性分離棄上清,。重復(fù)該操作2 次,。

4.3結(jié)合

在清洗后的磁珠懸液中加入500μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸,，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育,，室溫孵育

2 小時(shí)或者4°C 條件下孵育過(guò)夜。置于磁力架上磁性分離,，棄上清,。

4.4漂洗

在上述分離得到的磁珠中加入1mL 洗滌緩沖液，充分混懸磁珠,，磁性分離,，棄上清。重復(fù)

該操作3 次。

4.5洗脫

根據(jù)下游用途,，本說(shuō)明提供三種洗脫方法：

a. 變性洗脫法：

如需直接檢測(cè)目的蛋白,，則在上述洗滌過(guò)的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 1×SDS-PAGE 上樣

緩沖液，煮沸5mins,，冷卻至室溫后進(jìn)行磁性分離取上清進(jìn)行SDS-PAGE 檢測(cè),。

b. 酸性洗脫法：

向洗滌過(guò)的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 的洗脫液A 混合均勻， 室溫震蕩混10mins,。分離

磁珠,，收集上清至新EP 管，按洗脫液:中和液=5:1 的比例加入中和液,，調(diào)節(jié)洗脫液pH 至中性,。

c. 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫法：

向洗滌過(guò)的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 的洗脫液A 混合均勻，室溫孵育1 小時(shí)或者4°C 條

件下孵育2-4h,。分離磁珠,，收集上清至新EP 管，即為目的蛋白,。

注：可重復(fù)洗脫步驟以獲得更高的回收率