SUMO 蛋白酶也被稱為 Ulp1(RP1002),是釀酒酵母中ULP1(Ubl特異性蛋白酶1)的重組片段,為一種高活性半胱氨酸蛋白酶。與普通蛋白酶識(shí)別一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸序列不同,SUMO蛋白酶識(shí)別泛素樣蛋白SUMO的三級(jí)結(jié)構(gòu),可以高度特異性地將重組融合蛋白中的 SUMO標(biāo)簽切除。SUMO 蛋白酶在很寬的溫度(4℃~30℃)和pH(pH 7.0~9.0)范圍內(nèi)都具有活性,其中最佳催化溫度為30℃。本產(chǎn)品為大腸桿菌表達(dá)的重組SUMO 蛋白酶,帶有 His 標(biāo)簽,在融合蛋白切割后,可利用鎳柱親和層析輕松將其去除。
使用方法
1. 直接將蛋白酶添加到純化好的待切割蛋白溶液中,推薦使用比例:1mg待切割蛋白添加20 U Ulp1;推薦反應(yīng)條件:4℃,過夜酶切;
2. 用戶可以根據(jù)所研究的蛋白探索使用條件,可以在30℃,固定酶添加量20 U/mg,探究酶切時(shí)間1-6 h;或在4℃,固定過夜酶切時(shí)間,探究酶添加量10-40 U/mg;
3. 反應(yīng)完成后,可取少量酶切產(chǎn)物進(jìn)行 SDS-PAGE 分析,酶切后體系中的 SUMO 蛋白酶可通過IMAC樹脂親和層析去除。
注意事項(xiàng)
1. 為達(dá)到最好的酶切效果,請(qǐng)保證樣本為部分或完全純化的蛋白;
2. 反應(yīng)體系中咪唑的濃度應(yīng)低于 150 mM,否則 SUMO 蛋白酶的活性會(huì)受到抑制;
3. SUMO 蛋白酶的理想反應(yīng)液中 NaCl 的濃度為 150mM。不過根據(jù)實(shí)際情況,可在 100mM~300mM 之間調(diào)節(jié) NaCl 的濃度以達(dá)到最佳的效果;
4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作;
5. 本產(chǎn)品僅限科研使用。
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